注意:物镜和聚光镜的数值孔径越大,其工作距离(或者理解为焦距)越短。孔径光阑数值越大,显微镜成像的对比度越低,景深越小。
另外,照明光源的色温会影响到显色效果。同一个标本,照明色温比较低时,标本中的红色就比较鲜艳,蓝色比较暗;相反色温偏越高时,标本中蓝色就越鲜艳红色越暗。
显微镜常用作明场照明的光源有两种:卤素灯和LED灯。
卤素灯的整体色温比较低,看起来明显偏黄色,一般会在照明光路里加一个日光滤片提高色温,使标本的颜色更均衡。然而卤素灯的色温会随着灯的亮度而变化,灯调节的越亮,色温越高。我们知道在使用显微镜从低倍物镜转换到高倍物镜时,需要调亮照明光来保证目镜观察到的视野亮度一致,这样就会导致色温升高,从而使得高倍镜看到的标本中蓝色结构比低倍镜中更鲜艳,而低倍镜中看到的红色结构更鲜艳。要解决这个色彩偏差,方法有:
1. 基础的显微镜可以配置恒定亮度的物镜组,低倍镜跟高倍镜的亮度一样,这样就不需要调整灯的亮度。
2. 高级的全自动显微镜使用恒定色温转轮,根据不同物镜自动调整卤素灯亮度并自动调节色温转轮,来使最终的照明色温保持恒定。
3. 使用恒定色温的照明光源:LED灯。
LED灯的色温恒定,不会随亮度变化。显微镜明场照明用的LED灯通常色温恒定在5000K,接近太阳光的平均色温。
最后使用显微镜配备的摄像头拍照时,如果发现电脑屏幕上呈现的图像偏色,就需要先做一下白平衡。
选取视野中的空白区域作为参照进行白平衡