南京一日游的最佳路线可以根据个人的兴趣和时间来定制。以下是一个建议的路线，它涵盖了南京的多个著名景点和特色区域：
路线：总统府——鸡鸣寺——玄武湖公园——老门东——夫子庙——秦淮河游船
1. 总统府
介绍：南京总统府拥有着许多保存完好的近代中西建筑，以及不少珍贵的历史文物。园内的园林设计和绿化环境都十分优美，极具江南古典园林艺术风格。时间建议：预计游览时间为1至2小时。2. 鸡鸣寺
介绍：位于南京玄武区，是一座完全建在山上的一座皇家寺庙，也是南京市内最古老的寺庙，距今已有1700多年的历史。从鸡鸣寺地铁站5号出口出来，有一条满是樱花盛开的樱花大道，春季盛花期时尤为美丽。时间建议：预计游览时间为1小时。3. 玄武湖公园
介绍：玄武湖距离鸡鸣寺很近，公园对游客免费开放。湖景优美，周边还有南京古城墙，只需每人30元的票价即可上去拍照。公园内还有许多亲子游玩项目，适合家庭游玩。时间建议：预计游览时间为2至3小时。4. 老门东
介绍：老门东美食居多，位置在南京的秦淮区。景色也不错，春季出行还能看到景区四处盛开的紫藤花、映山红、木香花以及蔷薇花等。对于吃货游客来说，老门东的庙东排骨以及一些南京老字号都让人难忘。时间建议：预计游览时间为1至2小时，并品尝当地美食。5. 夫子庙
介绍：夫子庙即南京孔庙，是我国第一所国家最高学府，也是中国四大文庙之一。夫子庙南端有一条著名的美食街，聚集着超过200种的传统美食和风味小吃。时间建议：预计游览时间为2小时，并在美食街品尝南京特色小吃。6. 秦淮河游船
介绍：秦淮河自古以来就十分繁华，游船是体验秦淮河风光的最佳方式。游客可以近距离感触秦淮河水，欣赏两岸的灯火辉煌和美丽夜景。时间建议：游船航程约40分钟，每20分钟一班船。船票价格为80元。此路线涵盖了南京的历史文化、自然风光和美食体验，适合一日游的行程安排。当然，具体的行程可以根据个人兴趣和时间进行适当调整。