地铁1号线途径栖霞区、鼓楼区、玄武区、秦淮区、雨花台区和江宁区，线路北起迈皋桥站，沿南京主城区中轴线一路南下，于安德门站向东南转至东山新城，进入江宁大学城，南至中国药科大学站。线路总长38.9千米；共设置27座车站，其中地下站16座，地面及高架站11座。车站自北向南依次为：迈皋桥站、红山动物园站、南京站、新模范马路站、玄武门站、鼓楼站、珠江路站、新街口站、张府园站、三山街站、中华门站、安德门站、天隆寺站、软件大道站、花神庙站、南京南站、双龙大道站、河定桥站、胜太路站、百家湖站、小龙湾站、竹山路站、天印大道站、龙眠大道站、南医大•江苏经贸学院站、南京交院站、中国药科大学站。
南京地铁1号线北延线路全长6.52km，其中高架段0.32km，过渡段0.37km，地下段5.83km，全线共新设5座车站，均为地下站，平均站间距为1.34km。1号线北延开通后，1号线全长45.42km，32座车站。线路起点为既有迈皋桥站，终点至八卦洲大桥南站，设二桥公园停车场1处。线路全线利用既有迈皋桥主变电站及珠江路控制中心。车辆选型为初、近、远期均采用A型6节编组，牵引供电为直流1500V。列车最高运行速度为80km/h。